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原代培养经验分享

时间:2017-08-02 浏览次数:1088

经验分享:

1.原代细 胞铺満瓶底后弃原液,PBS冲洗2次。

2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆盖瓶底即可,室温作用,镜下观 察至组织块周围的细胞回缩,立体感增强。

3.弃去消化液,PBS轻漂一遍(目的是除去EDTA,它对脆 弱的原代细胞很不好)但不要用力摇晃,以免部 分消化稍过的细胞流失。

4.加入培养液吹打,不要产生气泡,对细胞有损。

5.吸出2/3的悬液传入新瓶。
6.向原瓶中余下的1/3细胞悬液中补加2/3的新培养液,与未消 化的组织块继续培养。

7. 24小时内 新的细胞又从组织块中爬出啦,等铺满 后再如上所述做一次吧。
 

注:

1.只有当 原代培养时组织块较多时才这样做,否则得不偿失。

2.保留1/3的细胞 是为了让余下的组织块在细胞间作用下迅速健康的生长。

3.一瓶细 胞以此法处理不要超过3次。