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线粒体 的活体染色的及电镜照片观察

时间:2015-09-10 浏览次数:2123

实验原理


线粒体 是细胞内一种重要细胞器,是细胞 进行呼吸作用的场所。细胞的 各项活动所需要的能量,主要是 通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染 色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B 是线垃 体的专一性活体染色剂。线粒体 中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色,而在周 围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。


锚点

实验试剂


1. l/300 詹纳斯绿B 染液

2. Ringer 氏液(哺乳类用)


锚点

实验设备


1. 显微镜

2. 手术器材一套

3. 解剖盘

4. 小平皿

5. 载片

6. 盖片

7. 吸水纸

8. 10ml注射器

9. 吸管


锚点

实验材料


兔子一只、线粒体的电镜照片。


锚点

实验步骤


1. 兔肝细 胞线粒体的活体染色

   1) 用空气栓塞处死兔子,置于解剖盘内,迅速打开腹腔。

   2) 取兔肝 边缘较薄的肝组织一小块(2~3mm3),放入盛有Ringer 氏液的 平皿内洗去血液(用镊子轻压),用吸管吸去Ringer 氏液,在平皿内加1/300 詹纳斯绿B 染液,让组织 块上表面露在染液外面,使细胞 内线粒体的酶系可进行充分的氧化,这样才 有利于保持染料的氧化状态,使线粒体着色。当组织 块边缘染成篮色时即可,一般需要染30 分钟。

   3) 染色后,将组织块移到载片上,用镊子将组织块拉碎,就会有 一些细胞或细胞群从组织块脱离。将稍大的组织块去掉,使游离 的细胞或细胞群留在载片上,加一滴Ringer 氏液,盖上盖片,吸去多余水分。

2. 结果

   1) 显微镜观察,肝细胞 质中许多线粒体被染成蓝绿色,呈颗粒状。

   2) 线粒体 的光镜切片观察

用詹纳斯绿B 染色的 兔肝细胞光镜切片,肝细胞 中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

   3) 线粒体 的电镜照片观察

不同细 胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样,如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体 的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关,线粒体 多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。线粒体 脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与 线粒体长轴垂直排列,但也可 见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横 切面呈囊状或管状。脊的数 量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。